VPAC2CRISPR激活质粒(h): sc-402062-ACT
- 针对种属：human
- 20 µg 纯化的即用型的质粒DNA，最多可供20次转染
- VPAC2 CRISPER激活质粒（h）是一种协同激活介质（SAM）转录激活系统，目的在于特定上调基因表达
- VPAC2 CRISPR 激活质粒 (h)包含三种质量比为1:1:1的质粒：一种质粒编码与转录激活结构域VP64融合的去活化的Cas9 (dCas9)核酸酶(D10A and N863A)，和杀稻瘟素抗性基因；一种质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白，和潮霉素抗性基因；一种质粒编码与两个MS2 RNA适体融合的目标特异的20 nt向导RNA，和嘌呤霉素抗性基因。
- 形成的SAM复合物结合到转录起始位点上游大约200-250 nt的特定位点区域，为高效激活基因提供转录因子的招募
- 由 VPAC2 CRISPR 激活质粒 (h) 和 VPAC2 CRISPR 激活质粒 (h2) 编码的 gRNA 分别针对 VIPR2 转录起始位点上游的不同调控区域。其中一种或两种设计可能可用
- 转染后，基因敲除效率可以用抗体：VPAC2: sc-135604，通过WB, IF或者IHC分析
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| 产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格 | 数量 | 收藏夹 | |
VPAC2CRISPR激活质粒(h) | sc-402062-ACT | 20 µg | CNY2986.00 | |||
VPAC2CRISPR激活质粒(h2) | sc-402062-ACT-2 | 20 µg | CNY2986.00 |
人类 VIPR2 基因编码 VPAC2 受体，这是一种 B 类 G 蛋白偶联受体（GPCR），可结合血管活性肠肽（VIP）和垂体腺苷酸环化酶激活多肽（PACAP）。VPAC2 主要与 Gs 蛋白偶联，从而提高 cAMP 水平并激活 PKA 依赖的转录程序；此外，其对 MAPK/ERK 信号通路和钙离子动态的影响会因细胞环境不同而有所差异。该受体通过塑造细胞因子信号以及细胞对神经肽的反应性，调控神经内分泌通讯、昼夜节律与代谢调节以及免疫细胞活性。VIPR2/VPAC2 信号的失调及拷贝数变异与神经精神和发育相关表型有关；其通路活性的改变也已在炎症性与代谢性疾病的生物学研究中得到探讨。
VPAC2 CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性VIPR2的表达。
VPAC2 CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的VIPR2基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于VIPR2转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性VPAC2表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的VIPR2位点，并能够研究内源性位点上依赖于VPAC2的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在VIPR2表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟VPAC2通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。