Von Hippel Lindau/VHLCRISPR激活质粒(h): sc-400528-ACT

VHL 编码 von Hippel–Lindau（VHL）肿瘤抑制蛋白，它是 VCB-CUL2 E3 泛素连接酶复合体中负责底物识别的组分，可将羟基化的 HIF-1α 和 HIF-2α 靶向至蛋白酶体降解。VHL 通过对 HIF 转录程序的氧依赖性调控，控制缺氧信号传导、血管生成因子表达、代谢适应以及与红细胞生成相关的通路。VHL 还参与细胞外基质组装、微管稳定性和纤毛相关信号传导，从而与细胞极性和应激反应的更广泛调控相联系。VHL 的缺失或功能障碍与异常的缺氧信号高度相关，是 VHL 病和肾细胞癌生物学的标志性特征。

Von Hippel Lindau/VHL CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性VHL的表达。

Von Hippel Lindau/VHL CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的VHL基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于VHL转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性Von Hippel Lindau/VHL表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的VHL位点，并能够研究内源性位点上依赖于Von Hippel Lindau/VHL的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在VHL表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟Von Hippel Lindau/VHL通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。