VIPCRISPR激活质粒(h): sc-400776-ACT
- 针对种属：human
- 20 µg 纯化的即用型的质粒DNA，最多可供20次转染
- VIP CRISPER激活质粒（h）是一种协同激活介质（SAM）转录激活系统，目的在于特定上调基因表达
- VIP CRISPR 激活质粒 (h)包含三种质量比为1:1:1的质粒：一种质粒编码与转录激活结构域VP64融合的去活化的Cas9 (dCas9)核酸酶(D10A and N863A)，和杀稻瘟素抗性基因；一种质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白，和潮霉素抗性基因；一种质粒编码与两个MS2 RNA适体融合的目标特异的20 nt向导RNA，和嘌呤霉素抗性基因。
- 形成的SAM复合物结合到转录起始位点上游大约200-250 nt的特定位点区域，为高效激活基因提供转录因子的招募
- 由 VIP CRISPR 激活质粒 (h) 和 VIP CRISPR 激活质粒 (h2) 编码的 gRNA 分别针对 VIP 转录起始位点上游的不同调控区域。其中一种或两种设计可能可用
- 转染后，基因敲除效率可以用抗体：VIP: sc-25347，通过WB, IF或者IHC分析
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| 产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格 | 数量 | 收藏夹 | |
VIPCRISPR激活质粒(h) | sc-400776-ACT | 20 µg | $397.00 |
血管活性肠肽（VIP）是一种分泌型神经肽激素，主要通过B类GPCR受体VPAC1（VIPR1）和VPAC2（VIPR2）传递信号，刺激腺苷酸环化酶活性，提高cAMP水平，并激活依赖PKA的转录程序。在人类中，VIP参与神经内分泌通讯、平滑肌松弛、昼夜节律与神经免疫调控以及上皮分泌，并通过下游影响MAPK信号和细胞因子网络发挥作用。VIP通路活性常在炎症与免疫细胞极化、气道与胃肠道生理以及神经生物学等研究背景中被重点关注；VIP信号异常与肿瘤微环境调节以及神经炎症状态有关联。由于VIP会被快速加工处理，并以旁分泌/内分泌方式发挥作用，对其进行可控上调有助于解析受体特异性的信号动态以及分泌肽生物学机制。
VIP CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性VIP的表达。
VIP CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的VIP基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于VIP转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性VIP表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的VIP位点，并能够研究内源性位点上依赖于VIP的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在VIP表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟VIP通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。