VillinCRISPR激活质粒(h): sc-400587-ACT

VIL1 编码的蛋白为 villin，是一种可与肌动蛋白结合并切割肌动蛋白丝的蛋白，富集于肠道和肾脏上皮细胞的微绒毛中，在那里帮助建立并重塑顶端刷状缘。Villin 通过对 F-肌动蛋白束化与切割的 Ca²⁺ 依赖性调控，影响细胞骨架组织、上皮极性和细胞运动性，将膜动态变化与吸收性上皮的分化程序相连接。作为肠上皮吸收细胞谱系的经典标志物，VIL1 表达的改变常被用来追踪炎症、损伤应答以及致癌转化过程中上皮状态的变化。这些特性使 villin 成为研究人源上皮模型中微绒毛结构、屏障生物学以及依赖细胞骨架的信号传导的有用切入点。

Villin CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性VIL1的表达。

Villin CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的VIL1基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于VIL1转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性Villin表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的VIL1位点，并能够研究内源性位点上依赖于Villin的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在VIL1表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟Villin通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。