USP10CRISPR激活质粒(h): sc-404281-ACT

人类 USP10 基因编码一种泛素特异性蛋白酶，可从靶蛋白上去除泛素链，从而调控其稳定性、定位及信号输出。USP10 参与对 DNA 损伤应答、应激信号以及蛋白质质量控制的泛素依赖性调控，包括对与 p53 调控、自噬和内体转运相关通路的调节。通过塑造蛋白稳态与检查点信号传导，USP10 会影响细胞对基因毒性与氧化应激的反应，而这些过程在癌症和神经退行性疾病中常常发生紊乱。USP10 活性改变与泛素信号及炎症信号程序的失调相关，因此可作为研究通路重布线机制的一个有用节点。

USP10 CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性USP10的表达。

USP10 CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的USP10基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于USP10转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性USP10表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的USP10位点，并能够研究内源性位点上依赖于USP10的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在USP10表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟USP10通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。