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Thrombin R双切口酶质粒(m) | sc-420264-NIC | 20 µg | CNY3084.00 |
小鼠 F2r 基因编码凝血酶受体(PAR1),这是一种通过蛋白水解切割而被激活的 G 蛋白偶联受体,激活后可通过 Gq、Gi 和 G12/13 通路启动信号传导。PAR1 的激活会促进磷脂酶 C 活化与钙离子动员、依赖 RhoA/ROCK 的细胞骨架重塑,以及 MAPK/ERK 信号,从而将凝血过程与血管反应和炎症反应联系起来。在内皮细胞、血小板和白细胞中,F2r 影响屏障功能、血小板活化、细胞因子产生以及细胞迁移。凝血酶–PAR1 信号失调已在血栓形成、血管损伤、动脉粥样硬化、纤维化和神经炎症等实验模型中被证明与之相关,使 F2r 成为研究止血相关信号机制的一个重要靶点。
Thrombin R 双切酶质粒(m)由一对匹配的质粒组成,专为在 mouse 细胞系中对 F2r 位点进行高特异性编辑而设计。每个质粒分别表达Cas9 D10A切口酶和针对F2r内不同DNA链的独特sgRNA。当这两种切口酶被引导至相邻但位于DNA链相反侧的位点时,会产生错位的单链切口,从而共同形成错位双链断裂,这需要两个引导RNA在靶位点上协同发挥作用。由此产生的DNA断裂通过内源性细胞修复途径(最常见的是非同源末端连接(NHEJ))得到修复,从而导致插入或缺失,进而破坏F2r的功能。通过要求双sgRNA在靶位点结合,双切口方法提高了编辑特异性,并为需要对靶向精度进行额外控制的应用提供了互补的CRISPR策略。
为高效识别编辑后的细胞,其中一个质粒编码GFP以实现转染细胞群的荧光可视化,而配套质粒则携带嘌呤霉素抗性基因用于抗生素筛选。这些特性共同支持共转染细胞群的高效富集,并简化了F2r基因失活克隆的验证流程。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。