TFEBCRISPR激活质粒(h): sc-401388-ACT

人源 TFEB（转录因子 EB）是溶酶体生物发生与自噬的主调控因子，可协调 CLEAR 网络基因的表达，从而控制内吞-溶酶体功能、膜运输以及细胞清除过程。TFEB 活性与营养感知密切相关：其通过 mTORC1 依赖的磷酸化与核转位来调控，将代谢应激信号与分解代谢程序整合起来。TFEB 信号失调与蛋白稳态受损及溶酶体相关功能障碍有关，这些现象广泛见于神经退行性疾病、溶酶体贮积症以及肿瘤生物学研究中。作为一个转录调控枢纽，TFEB 为研究自噬通量、溶酶体重塑以及应激适应性的转录网络提供了一个可操作的切入点。

TFEB CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性TFEB的表达。

TFEB CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的TFEB基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于TFEB转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性TFEB表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的TFEB位点，并能够研究内源性位点上依赖于TFEB的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在TFEB表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟TFEB通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。