SRC-1CRISPR激活质粒(h): sc-400879-ACT

NCOA1 编码类固醇受体共激活因子-1（SRC-1）。SRC-1 是一种转录共激活因子，可整合来自核受体及其他转录因子的配体依赖性信号，从而调控染色质可及性以及由 RNA 聚合酶 II 驱动的基因表达。SRC-1 可招募组蛋白乙酰转移酶及其他共调控因子，协同调节与激素应答性转录、代谢稳态、细胞周期控制和发育分化相关的程序。通过与雌激素受体、雄激素受体、糖皮质激素受体以及生长因子应答通路的串扰，SRC-1 参与情境依赖性的转录重塑。NCOA1/SRC-1 的表达或共激活活性发生改变，已被关联到激素相关疾病生物学中所见的内分泌信号及转录网络失衡，为研究通路特异性的基因调控提供了机制切入点。

SRC-1 CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性NCOA1的表达。

SRC-1 CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的NCOA1基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于NCOA1转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性SRC-1表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的NCOA1位点，并能够研究内源性位点上依赖于SRC-1的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在NCOA1表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟SRC-1通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。