SH-PTP2CRISPR激活质粒(h): sc-400260-ACT

PTPN11 编码 SH-PTP2（SHP2），这是一种位于胞质的蛋白酪氨酸磷酸酶，含有串联的 SH2 结构域，能够将被激活的受体酪氨酸激酶和细胞因子受体与下游信号通路相连接。SHP2 是 RAS–MAPK/ERK 通路的关键正向调控因子，并参与对 PI3K–AKT 通路的调节，从而塑造细胞增殖、生存、迁移与分化等程序。通过对对接蛋白及反馈节点进行去磷酸化，SHP2 影响生长因子与免疫信号网络中信号的强度与持续时间。PTPN11 活性与表达失调与发育综合征及多种癌症相关，因此常被用作研究致癌信号机制与耐药回路的重点靶点。

SH-PTP2 CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性PTPN11的表达。

SH-PTP2 CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的PTPN11基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于PTPN11转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性SH-PTP2表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的PTPN11位点，并能够研究内源性位点上依赖于SH-PTP2的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在PTPN11表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟SH-PTP2通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。