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SerpinB1CRISPR激活质粒(h) | sc-402083-ACT | 20 µg | CNY2986.00 |
SERPINB1 编码细胞内丝氨酸蛋白酶抑制剂 SerpinB1,它属于 B 类丝氨酸蛋白酶抑制剂(clade B serpin),可抑制中性粒细胞来源的蛋白酶(如弹性蛋白酶、组织蛋白酶 G 和蛋白酶 3),从而在炎症过程中限制蛋白水解性损伤。通过调控蛋白酶活性,SerpinB1 影响白细胞存活、抗微生物应答以及组织重塑程序,并与先天免疫信号及炎症应激通路发生交叉。SERPINB1 的表达或活性失衡与炎症稳态改变及蛋白酶驱动的损伤有关,见于影响黏膜与肺组织的疾病,也涉及更广泛的免疫介导疾病背景。这些特征使 SERPINB1 成为研究蛋白酶–抗蛋白酶平衡、中性粒细胞生物学以及炎症相关重塑的有用节点。
SerpinB1 CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性SERPINB1的表达。
SerpinB1 CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的SERPINB1基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于SERPINB1转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性SerpinB1表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的SERPINB1位点,并能够研究内源性位点上依赖于SerpinB1的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在SERPINB1表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟SerpinB1通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。