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RKIP双切口酶质粒(m) | sc-423929-NIC | 20 µg | CNY3084.00 | |||
RKIP双切口酶质粒(m2) | sc-423929-NIC-2 | 20 µg | CNY3084.00 |
小鼠 Pebp1 编码 Raf 激酶抑制蛋白(RKIP),这是一种保守的激酶信号调控因子,可抑制 RAF–MEK–ERK 级联反应,并塑造该通路信号强度与持续时间。RKIP 还可通过调控 GRK2 与 GPCR 信号发生关联,并能影响与 NF-κB 相关的炎症反应,从而与细胞增殖、分化及应激信号的更广泛调控相联系。RKIP 的丰度或活性改变与多种相关表型有关,涉及致癌信号、上皮–间质可塑性以及炎症或神经退行性过程,使 Pebp1 成为在小鼠模型中开展通路层面机制研究的一个有用节点。
RKIP 双切酶质粒(m)由一对匹配的质粒组成,专为在 mouse 细胞系中对 Pebp1 位点进行高特异性编辑而设计。每个质粒分别表达Cas9 D10A切口酶和针对Pebp1内不同DNA链的独特sgRNA。当这两种切口酶被引导至相邻但位于DNA链相反侧的位点时,会产生错位的单链切口,从而共同形成错位双链断裂,这需要两个引导RNA在靶位点上协同发挥作用。由此产生的DNA断裂通过内源性细胞修复途径(最常见的是非同源末端连接(NHEJ))得到修复,从而导致插入或缺失,进而破坏Pebp1的功能。通过要求双sgRNA在靶位点结合,双切口方法提高了编辑特异性,并为需要对靶向精度进行额外控制的应用提供了互补的CRISPR策略。
为高效识别编辑后的细胞,其中一个质粒编码GFP以实现转染细胞群的荧光可视化,而配套质粒则携带嘌呤霉素抗性基因用于抗生素筛选。这些特性共同支持共转染细胞群的高效富集,并简化了Pebp1基因失活克隆的验证流程。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。