非 CRISPR 数据：图片说明了可视化 CRISPR 实验结果的抗体质量。
PERK 抗体 (B-5): sc-377400. MCF7 (A), A549 (B), K-562 (C) 和 3T3-L1 (D) 全细胞裂解液中 PERK 表达的 Western 印迹分析. 所用检测试剂: m-IgGκ BP-HRP: sc-516102.
非 CRISPR 数据：图片说明了可视化 CRISPR 实验结果的抗体质量。
非 CRISPR 数据：图片说明了可视化 CRISPR 实验结果的抗体质量。
PERK双切口酶质粒(m): sc-420142-NIC
- 针对种属：mouse
- 20 µg 纯化的即用型的质粒DNA，最多可供20次转染
- PERK 双切口酶质粒（m）含有一对质粒，分别编码D10A突变的Cas9核酸酶，和目标特异的 20 nt 向导RNA （gRNA），与其相应的/%base_sku_name%/ CRISPR/Cas9敲除质粒相比，它在基因敲除方面具有更好的特异性
- 成对的向导RNA序列与目标基因中约20个碱基对互补，从而使Cas9可以模仿DNA双链断裂（DSB），介导特异的基因组DNA双切割
- 质粒对中的一个包含供筛选使用的嘌呤霉素抗性基因；另一个包含供观察转染使用的绿色荧光蛋白标记
- PERK双切酶质粒（m）和PERK双切酶质粒（m2）编码针对Eif2ak3的不同配对gRNA设计。其中一种或两种设计可能均有提供
- 转染后，基因敲除效率可以用抗体：PERK: sc-377400，通过WB, IF或者IHC分析
订购信息
| 产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格 | 数量 | 收藏夹 | |
PERK双切口酶质粒(m) | sc-420142-NIC | 20 µg | CNY3084.00 | |||
PERK双切口酶质粒(m2) | sc-420142-NIC-2 | 20 µg | CNY3084.00 |
小鼠 Eif2ak3 基因编码 PERK，这是一种内质网（ER）应激感受型激酶。PERK 通过磷酸化 eIF2α 启动未折叠蛋白反应（UPR），从而降低整体蛋白翻译水平，同时促进以 ATF4 依赖性信号为代表的适应性转录程序。在持续应激条件下，PERK 将蛋白质稳态与氧化还原调控、自噬以及细胞凋亡等命运决定过程相整合，进而影响分泌细胞功能与炎症输出。PERK 信号失调与多种以慢性 ER 应激为特征的疾病相关，包括代谢功能障碍、神经退行性变以及肿瘤细胞的应激适应，因此 Eif2ak3 是开展应激响应通路机制研究的关键节点。
PERK 双切酶质粒（m）由一对匹配的质粒组成，专为在 mouse 细胞系中对 Eif2ak3 位点进行高特异性编辑而设计。每个质粒分别表达Cas9 D10A切口酶和针对Eif2ak3内不同DNA链的独特sgRNA。当这两种切口酶被引导至相邻但位于DNA链相反侧的位点时，会产生错位的单链切口，从而共同形成错位双链断裂，这需要两个引导RNA在靶位点上协同发挥作用。由此产生的DNA断裂通过内源性细胞修复途径（最常见的是非同源末端连接（NHEJ））得到修复，从而导致插入或缺失，进而破坏Eif2ak3的功能。通过要求双sgRNA在靶位点结合，双切口方法提高了编辑特异性，并为需要对靶向精度进行额外控制的应用提供了互补的CRISPR策略。
为高效识别编辑后的细胞，其中一个质粒编码GFP以实现转染细胞群的荧光可视化，而配套质粒则携带嘌呤霉素抗性基因用于抗生素筛选。这些特性共同支持共转染细胞群的高效富集，并简化了Eif2ak3基因失活克隆的验证流程。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。