Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
PERK Antibody (B-5): sc-377400. Western blot analysis of PERK expression in untreated K-562 (A), chemically-treated K-562 (B) and HCT-116 (C) whole cell lysates. β-Actin (C4): sc-47778 used as loading control. Detection reagent used: m-IgG Fc BP-HRP: sc-525409.
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PERK双切口酶质粒(h): sc-400080-NIC
- 针对种属：human
- 20 µg 纯化的即用型的质粒DNA，最多可供20次转染
- PERK 双切口酶质粒（h）含有一对质粒，分别编码D10A突变的Cas9核酸酶，和目标特异的 20 nt 向导RNA （gRNA），与其相应的/%base_sku_name%/ CRISPR/Cas9敲除质粒相比，它在基因敲除方面具有更好的特异性
- 成对的向导RNA序列与目标基因中约20个碱基对互补，从而使Cas9可以模仿DNA双链断裂（DSB），介导特异的基因组DNA双切割
- 质粒对中的一个包含供筛选使用的嘌呤霉素抗性基因；另一个包含供观察转染使用的绿色荧光蛋白标记
- PERK双切酶质粒（h）和PERK双切酶质粒（h2）编码针对EIF2AK3的不同配对gRNA设计。其中一种或两种设计可能均有提供
- 转染后，基因敲除效率可以用抗体：PERK: sc-377400，通过WB, IF或者IHC分析
订购信息
| 产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格 | 数量 | 收藏夹 | |
PERK双切口酶质粒(h) | sc-400080-NIC | 20 µg | CNY3084.00 | |||
PERK双切口酶质粒(h2) | sc-400080-NIC-2 | 20 µg | CNY3084.00 |
EIF2AK3 编码 PERK，这是一种定位于内质网（ER）的跨膜蛋白激酶，能够感知未折叠蛋白的积累并启动未折叠蛋白反应（UPR）。PERK 被激活后会磷酸化 eIF2α，从而抑制整体蛋白翻译，同时促进特定选择性翻译程序，进而协调蛋白质稳态维持、氧化应激控制以及与自噬相关的适应性变化。PERK 信号通路与 ATF4/CHOP 介导的转录输出相互交叉，并影响内质网—线粒体的串扰以及细胞氧化还原稳态。PERK 活性失调与慢性内质网应激状态相关，而这些状态被认为参与神经退行性变、代谢功能障碍以及肿瘤细胞的应激适应，因此 PERK 是开展应激信号机制研究的关键节点。
PERK 双切酶质粒（h）由一对匹配的质粒组成，专为在 human 细胞系中对 EIF2AK3 位点进行高特异性编辑而设计。每个质粒分别表达Cas9 D10A切口酶和针对EIF2AK3内不同DNA链的独特sgRNA。当这两种切口酶被引导至相邻但位于DNA链相反侧的位点时，会产生错位的单链切口，从而共同形成错位双链断裂，这需要两个引导RNA在靶位点上协同发挥作用。由此产生的DNA断裂通过内源性细胞修复途径（最常见的是非同源末端连接（NHEJ））得到修复，从而导致插入或缺失，进而破坏EIF2AK3的功能。通过要求双sgRNA在靶位点结合，双切口方法提高了编辑特异性，并为需要对靶向精度进行额外控制的应用提供了互补的CRISPR策略。
为高效识别编辑后的细胞，其中一个质粒编码GFP以实现转染细胞群的荧光可视化，而配套质粒则携带嘌呤霉素抗性基因用于抗生素筛选。这些特性共同支持共转染细胞群的高效富集，并简化了EIF2AK3基因失活克隆的验证流程。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。