PAR-4CRISPR激活质粒(h): sc-401719-ACT
- 针对种属：human
- 20 µg 纯化的即用型的质粒DNA，最多可供20次转染
- PAR-4 CRISPER激活质粒（h）是一种协同激活介质（SAM）转录激活系统，目的在于特定上调基因表达
- PAR-4 CRISPR 激活质粒 (h)包含三种质量比为1:1:1的质粒：一种质粒编码与转录激活结构域VP64融合的去活化的Cas9 (dCas9)核酸酶(D10A and N863A)，和杀稻瘟素抗性基因；一种质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白，和潮霉素抗性基因；一种质粒编码与两个MS2 RNA适体融合的目标特异的20 nt向导RNA，和嘌呤霉素抗性基因。
- 形成的SAM复合物结合到转录起始位点上游大约200-250 nt的特定位点区域，为高效激活基因提供转录因子的招募
- 由 PAR-4 CRISPR 激活质粒 (h) 和 PAR-4 CRISPR 激活质粒 (h2) 编码的 gRNA 分别针对 F2RL3 转录起始位点上游的不同调控区域。其中一种或两种设计可能可用
- 转染后，基因敲除效率可以用抗体：PAR-4: sc-293206，通过WB, IF或者IHC分析
订购信息
| 产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格 | 数量 | 收藏夹 | |
PAR-4CRISPR激活质粒(h) | sc-401719-ACT | 20 µg | CNY2986.00 | |||
PAR-4CRISPR激活质粒(h2) | sc-401719-ACT-2 | 20 µg | CNY2986.00 |
F2RL3 编码蛋白酶激活受体4（PAR-4），这是一类G蛋白偶联受体，可被凝血酶及其他丝氨酸蛋白酶通过蛋白水解“暴露”其系链配体而激活。PAR-4 信号可动员 Gq 和 G12/13 通路，促进磷脂酶C活性、细胞内 Ca2+ 动员、RhoA/ROCK 信号，并启动下游的 MAPK 与 NF-κB 转录程序。在血小板及血管相关细胞中，这些级联反应调控细胞激活、分泌、细胞骨架重塑以及炎症相关的相互作用。PAR-4 活性失衡以及 F2RL3 表达模式异常与血栓相关生物学、血管炎症及肿瘤相关微环境信号有关，支持在止血机制与肿瘤—基质相互作用等方向开展机制研究。
PAR-4 CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性F2RL3的表达。
PAR-4 CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的F2RL3基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于F2RL3转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性PAR-4表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的F2RL3位点，并能够研究内源性位点上依赖于PAR-4的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在F2RL3表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟PAR-4通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。