The Double Nickase Plasmid features a U6 promoter for sgRNA expression, a 20 nt targeting sequence, and a gRNA scaffold to guide Cas9n. It includes a CBh promoter for Cas9n (D10A) and puromycin resistance, GFP for transfection verification, and nuclear localization signals (NLS). The 2A peptide allows co-expression of Cas9n and Puro from a single promoter, enabling precise genome editing with reduced off-target effects.
p300双切口酶质粒(h): sc-400055-NIC
- 针对种属：human
- 20 µg 纯化的即用型的质粒DNA，最多可供20次转染
- p300 双切口酶质粒（h）含有一对质粒，分别编码D10A突变的Cas9核酸酶，和目标特异的 20 nt 向导RNA （gRNA），与其相应的/%base_sku_name%/ CRISPR/Cas9敲除质粒相比，它在基因敲除方面具有更好的特异性
- 成对的向导RNA序列与目标基因中约20个碱基对互补，从而使Cas9可以模仿DNA双链断裂（DSB），介导特异的基因组DNA双切割
- 质粒对中的一个包含供筛选使用的嘌呤霉素抗性基因；另一个包含供观察转染使用的绿色荧光蛋白标记
- p300双切酶质粒（h）和p300双切酶质粒（h2）编码针对EP300的不同配对gRNA设计。其中一种或两种设计可能均有提供
- 转染后，基因敲除效率可以用抗体：p300: sc-48343，通过WB, IF或者IHC分析
订购信息
| 产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格 | 数量 | 收藏夹 | |
p300双切口酶质粒(h) | sc-400055-NIC | 20 µg | CNY3084.00 | |||
p300双切口酶质粒(h2) | sc-400055-NIC-2 | 20 µg | CNY3084.00 |
EP300 编码 p300，这是一种多效性的转录共激活因子和组蛋白乙酰转移酶（HAT）。p300 可乙酰化组蛋白以及众多转录因子上的赖氨酸残基，从而调控染色质可及性与基因表达程序。p300 整合来自发育与应激反应通路的信号，包括依赖 p53、HIF‑1、NF‑κB、TGF‑β/SMAD 以及核受体的转录调控，因此影响细胞周期控制、分化、DNA 损伤应答和代谢适应。作为核心表观遗传调控因子，EP300 的扰动与多种肿瘤背景下观察到的广泛转录失衡，以及神经发育表型相关，这反映了其在增强子活性和谱系特异性基因调控中的作用。这些特性使 p300 成为解析染色质介导的转录控制与信号依赖性基因调控网络的常用关键节点。
p300 双切酶质粒（h）由一对匹配的质粒组成，专为在 human 细胞系中对 EP300 位点进行高特异性编辑而设计。每个质粒分别表达Cas9 D10A切口酶和针对EP300内不同DNA链的独特sgRNA。当这两种切口酶被引导至相邻但位于DNA链相反侧的位点时，会产生错位的单链切口，从而共同形成错位双链断裂，这需要两个引导RNA在靶位点上协同发挥作用。由此产生的DNA断裂通过内源性细胞修复途径（最常见的是非同源末端连接（NHEJ））得到修复，从而导致插入或缺失，进而破坏EP300的功能。通过要求双sgRNA在靶位点结合，双切口方法提高了编辑特异性，并为需要对靶向精度进行额外控制的应用提供了互补的CRISPR策略。
为高效识别编辑后的细胞，其中一个质粒编码GFP以实现转染细胞群的荧光可视化，而配套质粒则携带嘌呤霉素抗性基因用于抗生素筛选。这些特性共同支持共转染细胞群的高效富集，并简化了EP300基因失活克隆的验证流程。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。