MFG-E8CRISPR激活质粒(h): sc-402282-ACT

人类 MFGE8 基因编码乳脂球表皮生长因子样因子 8（milk fat globule‑EGF factor 8，MFG‑E8），这是一种分泌型糖蛋白，可与凋亡细胞表面的磷脂酰丝氨酸结合，并通过 αvβ3、αvβ5 等整合素将凋亡细胞桥接至吞噬细胞，从而促进凋亡细胞清除（efferocytosis）及炎症消退。通过调控凋亡细胞清除过程，MFG‑E8 影响先天免疫信号传导、组织重塑和巨噬细胞极化，并进一步影响细胞因子基调以及细胞外基质稳态。MFGE8 的功能还与血管生成和创伤修复程序相互交叉，常在慢性炎症、纤维化以及肿瘤微环境生物学等研究背景下被关注；在这些情境中，清除缺陷或基质信号改变可能促成疾病相关表型。

MFG-E8 CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性MFGE8的表达。

MFG-E8 CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的MFGE8基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于MFGE8转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性MFG-E8表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的MFGE8位点，并能够研究内源性位点上依赖于MFG-E8的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在MFGE8表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟MFG-E8通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。