IP3R-IICRISPR激活质粒(m): sc-421193-ACT

小鼠 Itpr2 基因编码肌醇 1,4,5-三磷酸受体 2 型（IP3R-II），这是一种位于内质网的 Ca²⁺ 释放通道，可将 IP3 信号转化为细胞质内的钙瞬变。IP3R-II 在 GPCR 和受体酪氨酸激酶通路下游发挥作用，这些通路可激活磷脂酶 C，从而塑造分泌、收缩、代谢以及转录反应等 Ca²⁺ 依赖性过程。通过调控 Ca²⁺ 的时空动态与内质网 Ca²⁺ 稳态，Itpr2 影响细胞器间信号传递及应激反应，而这些过程在病理生理状态中常被扰动。IP3R 介导的钙信号失调与多种疾病相关机制有关，包括兴奋性改变、上皮转运缺陷，以及在神经和内分泌背景下细胞稳态的破坏。

IP3R-II CRISPR激活质粒（m）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性Itpr2的表达。

IP3R-II CRISPR激活质粒（m）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的Itpr2基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于Itpr2转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性IP3R-II表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的Itpr2位点，并能够研究内源性位点上依赖于IP3R-II的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在Itpr2表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟IP3R-II通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。