Integrin α4/ITGA4/CD49dCRISPR激活质粒(h): sc-401336-ACT

ITGA4 编码整合素 α4（CD49d），它是一种 α 亚基，可与 β1 或 β7 配对形成 VLA-4（α4β1）或 α4β7 整合素，介导细胞–细胞及细胞–基质黏附。通过与 VCAM1、纤维连接蛋白 CS-1 片段以及 MAdCAM1 结合，整合素 α4 调控白细胞归巢/迁移、牢固黏附以及跨内皮迁移，并将外向内（outside-in）信号与细胞骨架重塑相整合。ITGA4 相关信号与黏着斑（focal adhesion）、MAPK 和 PI3K 通路发生交叉，从而影响免疫与基质细胞群中的存活、激活状态和迁移行为。ITGA4 表达或功能的异常常在以下研究中被重点考察：炎症细胞募集、自身免疫相关的组织浸润，以及涉及转移扩散与免疫细胞定位的肿瘤–微环境相互作用。

Integrin α4/ITGA4/CD49d CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性ITGA4的表达。

Integrin α4/ITGA4/CD49d CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的ITGA4基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于ITGA4转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性Integrin α4/ITGA4/CD49d表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的ITGA4位点，并能够研究内源性位点上依赖于Integrin α4/ITGA4/CD49d的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在ITGA4表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟Integrin α4/ITGA4/CD49d通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。