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HXK II慢病毒激活颗粒(m) | sc-420866-LAC | 200 µl | CNY3422.00 |
小鼠 Hk2 基因编码己糖激酶 II(HXK II)。HXK II 是一种与线粒体相关的酶,通过将葡萄糖磷酸化生成葡萄糖-6-磷酸,催化糖酵解中第一个不可逆(承诺性)步骤,从而把葡萄糖摄取与糖酵解通量及其下游生物合成通路连接起来。HXK II 通过与线粒体外膜耦联并影响 ATP 利用、氧化还原平衡以及对凋亡的易感性,将代谢信号与细胞存活整合在一起。Hk2 的活性与胰岛素/PI3K–AKT 信号、缺氧应答以及营养感知网络相互交叉,共同协调糖酵解、磷酸戊糖途径以及补充三羧酸(TCA)循环的补料(anaplerotic)输入。在代谢重编程、炎症以及肿瘤相关的糖酵解表型模型中,HXK II 的表达或定位失调常被研究,表明其在以疾病为导向的机制研究中具有重要意义。
HXK II 慢病毒激活颗粒(m)通过将完整的协同激活介导体(SAM)转录激活系统包装到可直接转导的高滴度慢病毒颗粒中,满足了这一需求,从而能够在更广泛的人类细胞类型中高效上调 Hk2 表达。
HXK II 慢病毒激活颗粒(m)通过慢病毒转导递送协同激活介导体(SAM)系统的所有功能组分。该系统包含三种共同转导至靶细胞的颗粒制剂:一种编码与VP64转激活域融合的无催化活性的dCas9(D10A和N863A突变),并携带布拉西定抗性基因; 一种编码MS2-p65-HSF1融合蛋白并携带潮霉素抗性基因的制剂;以及一种编码靶标特异性20 nt sgRNA(与两个MS2 RNA适配体融合)并携带嘌呤霉素抗性基因的制剂。经过慢病毒转导和表达盒的基因组整合后,SAM组分得以稳定表达,并在Hk2转录起始位点上游的近端启动子区域内的靶位点组装。在此处,VP64、p65和HSF1协同作用,招募内源性转录 machinery,从而驱动内源性HXK II表达的持续上调。使用无核酸酶活性的 dCas9 可避免引入双链 DNA 断裂,并保留原生的 Hk2 基因组位点和调控架构。
慢病毒载体具有多项实用优势:稳定的基因组整合支持细胞分裂过程中的可遗传激活;高滴度颗粒制剂免去了内部病毒生产的需要;且与原代细胞、非增殖细胞及转染抗性细胞类型的兼容性,扩大了实验的可及性。可通过嘌呤霉素、潮霉素和布拉西定进行三重抗生素筛选,以确认并富集成功的转导。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。