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HRI双切口酶质粒(m) | sc-420950-NIC | 20 µg | CNY3084.00 | |||
HRI双切口酶质粒(m2) | sc-420950-NIC-2 | 20 µg | CNY3084.00 |
小鼠 Eif2ak1 编码血红素调控抑制因子(HRI),这是一种应激响应型 eIF2α 激酶,在血红素缺乏、氧化应激以及蛋白毒性应激条件下通过磷酸化 EIF2S1 来抑制全局翻译。HRI 是整合应激反应(ISR)的关键组成部分,负责协调翻译重编程以及下游转录程序(例如由 ATF4 驱动的适应性反应),从而恢复蛋白稳态与氧化还原平衡。在红系细胞中,HRI 有助于将血红素供应与珠蛋白合成相耦联,并在造血过程中支持细胞成熟;在更广泛的情境下,它把应激感知与核糖体功能和蛋白质质量控制联系起来。在与炎症和神经退行性过程相关的模型中,涉及 HRI 的 ISR 信号失调与异常翻译控制已与贫血相关表型以及应激适应不良有关联。
HRI 双切酶质粒(m)由一对匹配的质粒组成,专为在 mouse 细胞系中对 Eif2ak1 位点进行高特异性编辑而设计。每个质粒分别表达Cas9 D10A切口酶和针对Eif2ak1内不同DNA链的独特sgRNA。当这两种切口酶被引导至相邻但位于DNA链相反侧的位点时,会产生错位的单链切口,从而共同形成错位双链断裂,这需要两个引导RNA在靶位点上协同发挥作用。由此产生的DNA断裂通过内源性细胞修复途径(最常见的是非同源末端连接(NHEJ))得到修复,从而导致插入或缺失,进而破坏Eif2ak1的功能。通过要求双sgRNA在靶位点结合,双切口方法提高了编辑特异性,并为需要对靶向精度进行额外控制的应用提供了互补的CRISPR策略。
为高效识别编辑后的细胞,其中一个质粒编码GFP以实现转染细胞群的荧光可视化,而配套质粒则携带嘌呤霉素抗性基因用于抗生素筛选。这些特性共同支持共转染细胞群的高效富集,并简化了Eif2ak1基因失活克隆的验证流程。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。