HP1γCRISPR激活质粒(h): sc-417205-ACT

CBX3 编码异染色质蛋白 1 γ（HP1γ）。HP1γ 是一种与染色质相关的因子，能够识别并结合组蛋白 H3 第 9 位赖氨酸的甲基化修饰（H3K9me），并协助组织更高阶的染色质结构。HP1γ 通过与表观遗传“写入/读取”蛋白以及 RNA 加工机制相互作用，参与异染色质形成、转录调控、DNA 复制和 DNA 损伤应答。通过影响染色质可及性与基因组稳定性，CBX3 进而调控细胞周期进程、分化程序以及应激反应相关的基因表达网络。HP1γ 活性失衡以及 CBX3 表达模式改变，已与多种癌症和神经发育疾病中观察到的异常表观遗传状态相关，因此 CBX3 常被用作研究染色质与基因组维护机制的关键节点。

HP1γ CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性CBX3的表达。

HP1γ CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的CBX3基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于CBX3转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性HP1γ表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的CBX3位点，并能够研究内源性位点上依赖于HP1γ的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在CBX3表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟HP1γ通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。