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Histone H2A.XCRISPR激活质粒(h) | sc-400538-ACT | 20 µg | CNY2986.00 |
H2AFX 编码组蛋白变体 H2A.X。H2A.X 是染色质的核心组成部分,在 DNA 双链断裂发生后会迅速在 Ser139 位点被磷酸化(形成 γH2AX)。这一修饰通过招募介导蛋白和修复因子来启动 DNA 损伤应答信号传导,并协调 ATM/ATR 激酶通路、染色质重塑、检查点激活,以及通过非同源末端连接(NHEJ)和同源重组(HR)进行的修复。H2A.X 的动态变化会影响细胞对复制压力的耐受性、端粒稳定性,以及与染色质完整性相关的全基因组转录程序。与 H2AFX 相关的信号异常常在基因组不稳定、致癌应激以及对基因毒性暴露敏感性等背景下被研究。
Histone H2A.X CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性H2AFX的表达。
Histone H2A.X CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的H2AFX基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于H2AFX转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性Histone H2A.X表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的H2AFX位点,并能够研究内源性位点上依赖于Histone H2A.X的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在H2AFX表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟Histone H2A.X通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。