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Histamine H1 ReceptorCRISPR激活质粒(h) | sc-401393-ACT | 20 µg | CNY2986.00 | |||
Histamine H1 ReceptorCRISPR激活质粒(h2) | sc-401393-ACT-2 | 20 µg | CNY2986.00 |
HRH1 编码人组胺 H1 受体(histamine H1 receptor),这是一类 G 蛋白偶联受体(GPCR),主要与 Gq/11 偶联,从而激活磷脂酶 Cβ(PLCβ)、升高细胞内 Ca2+ 水平,并启动依赖 PKC 的信号传导。其下游通路包括 MAPK/ERK 级联反应以及转录调控程序,参与调节血管通透性、平滑肌张力和神经—免疫通讯。HRH1 的活性可影响炎症细胞迁移与细胞因子产生,并与过敏性炎症、瘙痒、气道高反应性以及与神经递质传递相关、涉及睡眠—觉醒调控的表型有关。在细胞模型中,HRH1 是研究 GPCR 信号动态、第二信使偶联以及刺激依赖性基因表达的一个易于操控的关键节点。
Histamine H1 Receptor CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性HRH1的表达。
Histamine H1 Receptor CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的HRH1基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于HRH1转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性Histamine H1 Receptor表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的HRH1位点,并能够研究内源性位点上依赖于Histamine H1 Receptor的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在HRH1表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟Histamine H1 Receptor通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。