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HAS2CRISPR激活质粒(m) | sc-420798-ACT | 20 µg | CNY2986.00 |
小鼠 Has2 编码透明质酸合酶 2(HAS2),这是一种位于质膜的酶,负责聚合生成透明质酸(hyaluronan),而透明质酸是细胞外基质中主要的糖胺聚糖之一。HAS2 介导的透明质酸生成可调控细胞周围基质的组织结构、含水状态以及力学信号转导,并通过与 CD44、RHAMM 等受体的相互作用,影响细胞迁移、黏附和增殖。Has2 的调控将发育形态发生与组织重塑连接到包括 TGF-β、ERK/MAPK 以及炎症相关信号在内的网络,这些信号共同重塑细胞外基质的动态变化。HAS2 活性及透明质酸丰度的异常与纤维化重塑、血管病理以及肿瘤微环境生物学相关,因此 Has2 是研究体内及小鼠培养细胞中基质依赖性表型的一个有用关键节点。
HAS2 CRISPR激活质粒(m)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性Has2的表达。
HAS2 CRISPR激活质粒(m)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的Has2基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于Has2转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性HAS2表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的Has2位点,并能够研究内源性位点上依赖于HAS2的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在Has2表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟HAS2通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。