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GALC双切口酶质粒(h) | sc-401025-NIC | 20 µg | CNY3084.00 | |||
GALC双切口酶质粒(h2) | sc-401025-NIC-2 | 20 µg | CNY3084.00 |
人类 GALC 基因编码半乳糖脑苷脂酶(galactocerebrosidase),这是一种溶酶体水解酶,能够裂解半乳糖基神经酰胺及相关鞘脂,从而支持髓鞘脂质周转以及更广泛的鞘脂分解代谢。GALC 活性参与溶酶体依赖的回收通路,并有助于维持少突胶质细胞、施万细胞及其他神经细胞类型的膜脂稳态。GALC 功能受损会改变溶酶体鞘脂的加工处理,并与神经退行性溶酶体贮积病理相关,为研究髓鞘形成、神经炎症和细胞应激反应提供了机制切入点。体外通过扰动 GALC 的模型常用于探究溶酶体生物学、脂质代谢重塑,以及下游的转录与蛋白稳态影响。
GALC 双切酶质粒(h)由一对匹配的质粒组成,专为在 human 细胞系中对 GALC 位点进行高特异性编辑而设计。每个质粒分别表达Cas9 D10A切口酶和针对GALC内不同DNA链的独特sgRNA。当这两种切口酶被引导至相邻但位于DNA链相反侧的位点时,会产生错位的单链切口,从而共同形成错位双链断裂,这需要两个引导RNA在靶位点上协同发挥作用。由此产生的DNA断裂通过内源性细胞修复途径(最常见的是非同源末端连接(NHEJ))得到修复,从而导致插入或缺失,进而破坏GALC的功能。通过要求双sgRNA在靶位点结合,双切口方法提高了编辑特异性,并为需要对靶向精度进行额外控制的应用提供了互补的CRISPR策略。
为高效识别编辑后的细胞,其中一个质粒编码GFP以实现转染细胞群的荧光可视化,而配套质粒则携带嘌呤霉素抗性基因用于抗生素筛选。这些特性共同支持共转染细胞群的高效富集,并简化了GALC基因失活克隆的验证流程。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。