FKRPCRISPR激活质粒(h): sc-404396-ACT

FKRP 编码 fukutin 相关蛋白（fukutin-related protein），这是一种定位于高尔基体的糖基转移酶，参与对 α-肌营养不良蛋白聚糖（α-dystroglycan）的翻译后修饰；α-肌营养不良蛋白聚糖是将细胞外基质连接到肌营养不良蛋白–糖蛋白复合体的关键受体。FKRP 通过参与 O-甘露糖型糖基化，维持基底膜完整性和肌膜稳定性，从而影响肌纤维的维持以及神经肌肉组织的结构组织。FKRP 依赖的糖基化一旦受损，会削弱 α-肌营养不良蛋白聚糖与其配体的结合能力，并与肌营养不良蛋白聚糖病（dystroglycanopathy）表型高度相关，包括肢带型肌营养不良以及若干先天性肌营养不良亚型。作为连接糖基化机制与细胞外基质信号的通路节点，FKRP 在肌肉病理及基质依赖性细胞行为的模型研究中被广泛关注。

FKRP CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性FKRP的表达。

FKRP CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的FKRP基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于FKRP转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性FKRP表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的FKRP位点，并能够研究内源性位点上依赖于FKRP的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在FKRP表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟FKRP通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。