Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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eIF4E双切口酶质粒(h): sc-400415-NIC
- 针对种属：human
- 20 µg 纯化的即用型的质粒DNA，最多可供20次转染
- eIF4E 双切口酶质粒（h）含有一对质粒，分别编码D10A突变的Cas9核酸酶，和目标特异的 20 nt 向导RNA （gRNA），与其相应的/%base_sku_name%/ CRISPR/Cas9敲除质粒相比，它在基因敲除方面具有更好的特异性
- 成对的向导RNA序列与目标基因中约20个碱基对互补，从而使Cas9可以模仿DNA双链断裂（DSB），介导特异的基因组DNA双切割
- 质粒对中的一个包含供筛选使用的嘌呤霉素抗性基因；另一个包含供观察转染使用的绿色荧光蛋白标记
- eIF4E双切酶质粒（h）和eIF4E双切酶质粒（h2）编码针对EIF4E的不同配对gRNA设计。其中一种或两种设计可能均有提供
- 转染后，基因敲除效率可以用抗体：eIF4E: sc-9976，通过WB, IF或者IHC分析
订购信息
| 产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格 | 数量 | 收藏夹 | |
eIF4E双切口酶质粒(h) | sc-400415-NIC | 20 µg | CNY3084.00 | |||
eIF4E双切口酶质粒(h2) | sc-400415-NIC-2 | 20 µg | CNY3084.00 |
EIF4E 基因编码 eIF4E 蛋白，它是 eIF4F 翻译起始复合体中负责结合 5' 端帽结构的亚基，可识别 mRNA 的 7-甲基鸟苷帽（m7G cap），并促进核糖体募集，从而启动蛋白质合成。eIF4E 的活性通过 4E-BP 蛋白介导的调控以及 MNK 依赖的磷酸化，将来自 PI3K–AKT–mTOR 与 MAPK 通路的信号整合起来，把生长信号与对参与增殖、生存和应激反应等转录本的选择性翻译相耦联。EIF4E 表达或信号调控失衡与肿瘤生物学中异常的翻译重编程相关，同时也在神经发育以及病毒-宿主相互作用研究中被提示具有作用。作为帽依赖性翻译的关键枢纽，EIF4E 常用于在人源细胞模型中研究翻译调控、mRNA 选择以及与蛋白质稳态相关的表型。
eIF4E 双切酶质粒（h）由一对匹配的质粒组成，专为在 human 细胞系中对 EIF4E 位点进行高特异性编辑而设计。每个质粒分别表达Cas9 D10A切口酶和针对EIF4E内不同DNA链的独特sgRNA。当这两种切口酶被引导至相邻但位于DNA链相反侧的位点时，会产生错位的单链切口，从而共同形成错位双链断裂，这需要两个引导RNA在靶位点上协同发挥作用。由此产生的DNA断裂通过内源性细胞修复途径（最常见的是非同源末端连接（NHEJ））得到修复，从而导致插入或缺失，进而破坏EIF4E的功能。通过要求双sgRNA在靶位点结合，双切口方法提高了编辑特异性，并为需要对靶向精度进行额外控制的应用提供了互补的CRISPR策略。
为高效识别编辑后的细胞，其中一个质粒编码GFP以实现转染细胞群的荧光可视化，而配套质粒则携带嘌呤霉素抗性基因用于抗生素筛选。这些特性共同支持共转染细胞群的高效富集，并简化了EIF4E基因失活克隆的验证流程。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。