eIF2BεCRISPR激活质粒(h): sc-403917-ACT
- 针对种属：human
- 20 µg 纯化的即用型的质粒DNA，最多可供20次转染
- eIF2Bε CRISPER激活质粒（h）是一种协同激活介质（SAM）转录激活系统，目的在于特定上调基因表达
- eIF2Bε CRISPR 激活质粒 (h)包含三种质量比为1:1:1的质粒：一种质粒编码与转录激活结构域VP64融合的去活化的Cas9 (dCas9)核酸酶(D10A and N863A)，和杀稻瘟素抗性基因；一种质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白，和潮霉素抗性基因；一种质粒编码与两个MS2 RNA适体融合的目标特异的20 nt向导RNA，和嘌呤霉素抗性基因。
- 形成的SAM复合物结合到转录起始位点上游大约200-250 nt的特定位点区域，为高效激活基因提供转录因子的招募
- 由 eIF2Bε CRISPR 激活质粒 (h) 和 eIF2Bε CRISPR 激活质粒 (h2) 编码的 gRNA 分别针对 EIF2B5 转录起始位点上游的不同调控区域。其中一种或两种设计可能可用
- 转染后，基因敲除效率可以用抗体：eIF2Bε: sc-55558，通过WB, IF或者IHC分析
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| 产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格 | 数量 | 收藏夹 | |
eIF2BεCRISPR激活质粒(h) | sc-403917-ACT | 20 µg | CNY2986.00 |
EIF2B5 编码真核翻译起始因子 2B（eIF2B）的 ε 亚基（eIF2Bε）。eIF2Bε 是一种具有催化活性的鸟嘌呤核苷酸交换因子，可将 eIF2–GDP 重新活化为 eIF2–GTP，从而维持帽依赖性翻译起始。eIF2Bε 是整合应激反应（ISR）中的关键枢纽：它将 eIF2α 的磷酸化与全局翻译抑制相连接，同时又允许选择性翻译有助于应激适应的转录本。通过对蛋白质稳态与应激颗粒动态的调控，EIF2B5 影响神经元和胶质细胞稳态、髓鞘形成程序，以及细胞对代谢与氧化应激的耐受能力。eIF2B 复合体功能的致病性破坏与消失性白质脑病（vanishing white matter leukodystrophy）及相关的 eIF2B 谱系疾病有关，因此 EIF2B5 是研究应激调控翻译机制的重要靶点。
eIF2Bε CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性EIF2B5的表达。
eIF2Bε CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的EIF2B5基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于EIF2B5转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性eIF2Bε表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的EIF2B5位点，并能够研究内源性位点上依赖于eIF2Bε的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在EIF2B5表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟eIF2Bε通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。