eIF2å CRISPR/CAS9 KO 质粒 (h): sc-400199. 空载体对照 (A) 和 eIF2å CRISPR/CAS9 KO 质粒转染 (B) HEK293T 全细胞裂解液中 eIF2å 表达的 Western 印迹分析. 印迹探针为 eIF2å (D-3): sc-133132. ß-actin (C4): sc-47778 作为特异性和负载对照.
eIF2α CRISPR/Cas9 KO质粒 (h): sc-400199
- 针对种属：human
- 20 µg 纯化的即用型的质粒DNA，最多可供20次转染
- eIF2α CRISPR/Cas9 基因敲除（KO）质粒（h） 是一组质粒混合物，每种质粒均编码 Cas9 核酸酶及针对特定靶点的 20 核苷酸引导 RNA（gRNA），其设计基于 GeCKO v2 文库中的序列，旨在实现最高的基因敲除效率
- gRNA序列引导Cas9在eIF2α基因组位点诱导位点特异性双链断裂（DSBs），从而通过非同源末端连接（NHEJ）实现基因敲除
- 嘌呤霉素抗性基因和 RFP 基因两侧有 LoxP 位点，因此在建立稳定的基因敲除细胞系后，可以通过 Cre 重组酶（Cre 向量：sc-418923）去除选择标记。
- 转染后，基因敲除效率可以用抗体：eIF2α: sc-133132，通过WB, IF或者IHC分析
订购信息
| 产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格 | 数量 | 收藏夹 | |
eIF2α CRISPR/Cas9 KO质粒 (h) | sc-400199 | 20 µg | $397.00 |
概述
EIF2S1 编码真核翻译起始因子 2 的 α 亚基（eIF2α），是帽依赖性翻译起始与蛋白质稳态（proteostasis）的核心调控因子。eIF2α 在 Ser51 位点的磷酸化可整合多种应激感知激酶（PERK/EIF2AK3、GCN2/EIF2AK4、PKR/EIF2AK2 和 HRI/EIF2AK1）的信号，通过调节三元复合物的可用性来抑制整体蛋白质合成，并在整合应激反应（ISR）中促进诸如 ATF4 等选择性翻译程序。通过该通路，eIF2α 将内质网应激、氨基酸缺乏、病毒识别以及氧化应激与适应性转录和翻译重塑联系起来。eIF2α 信号失调与癌细胞的应激耐受、神经退行性疾病中的蛋白聚集表型，以及由于翻译调控改变和应激颗粒动力学异常所致的代谢与炎症状态有关。
eIF2α CRISPR/Cas9 KO质粒（h）是一组旨在针对性地破坏human细胞系中EIF2S1基因的质粒池。每条质粒均共表达一种独特的单引导RNA（sgRNA），该sgRNA针对EIF2S1基因内的特定位点，并携带来自化脓性链球菌的Cas9核酸酶。这些质粒还编码GFP，可通过荧光显微镜或流式细胞术对成功转染的细胞进行荧光标记和富集。
多引导设计提高了在Cas9介导的双链断裂形成后，产生破坏EIF2S1开放阅读框的插入或缺失（indels）的概率。CRISPR/Cas9系统引入的DNA断裂通过内源性非同源末端连接（NHEJ）途径修复，通常会导致移码突变，从而使eIF2α蛋白表达失活。
该CRISPR敲除系统能够高效构建EIF2S1缺失的细胞模型，用于eIF2α信号传导研究、功能基因组学研究、癌症生物学研究以及人类细胞系中治疗反应的评估。
主要特点
- 针对对 eIF2α 功能至关重要的 EIF2S1 外显子的 sgRNA
通过单质粒共表达 SpCas9 和 sgRNA 以简化递送过程
GFP 报告基因用于识别转染细胞
针对多个 EIF2S1 基因组位点的质粒池以提高敲除效率
兼容转染递送
设计变体
CRISPRs +/- HDR
- 由 eIF2α CRISPR/Cas9 KO 质粒 (h) 和 eIF2α CRISPR/Cas9 KO 质粒 (h2) 编码的 gRNA 分别靶向 EIF2S1 基因座内的不同位点。可能提供其中一种或两种靶向设计。具体供应情况请参见相关产品。
由 eIF2α HDR 质粒（h）编码的 HDR 供体构建体以及 eIF2α HDR质粒（h2）编码的HDR供体构建体包含一个嘌呤霉素抗性盒和一个RFP报告基因，其两侧由EIF2S1同源臂包围，以支持在与CRISPR/Cas9敲除设计对应的特定EIF2S1靶位点进行同源导向修复。HDR供体的供应情况可能有所不同。请查看“相关产品”了解供应情况。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。