E2A CRISPR/Cas9 KO 质粒 (h): sc-423303. 空载体对照 (A) 和 E2A CRISPR/Cas9 KO 质粒转染 (B) 的 NIH/3T3 全细胞裂解液中人类 E2A 表达的 Western 印迹分析. 印迹探针为 E2A (Yae): sc-416. 肌动蛋白 (I-19): sc-1616 用作特异性和负载对照.
E2A CRISPR/Cas9 KO质粒 (m): sc-423303
- 针对种属：mouse
- 20 µg 纯化的即用型的质粒DNA，最多可供20次转染
- E2A CRISPR/Cas9 基因敲除（KO）质粒（m） 是一组质粒混合物，每种质粒均编码 Cas9 核酸酶及针对特定靶点的 20 核苷酸引导 RNA（gRNA），其设计基于 GeCKO v2 文库中的序列，旨在实现最高的基因敲除效率
- gRNA序列引导Cas9在E2A基因组位点诱导位点特异性双链断裂（DSBs），从而通过非同源末端连接（NHEJ）实现基因敲除
- 嘌呤霉素抗性基因和 RFP 基因两侧有 LoxP 位点，因此在建立稳定的基因敲除细胞系后，可以通过 Cre 重组酶（Cre 向量：sc-418923）去除选择标记。
- 转染后，基因敲除效率可以用抗体：E2A: sc-416，通过WB, IF或者IHC分析
订购信息
| 产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格 | 数量 | 收藏夹 | |
E2A CRISPR/Cas9 KO质粒 (m) | sc-423303 | 20 µg | CNY2986.00 |
概述
Tcf3 编码 E2A 这一类碱性螺旋-环-螺旋（bHLH）转录因子，它是谱系承诺与分化程序的关键调控者，尤其在造血与淋巴系统中作用突出。E2A 可形成二聚体并结合 E-box 基序，从而调控涉及细胞周期控制、细胞凋亡和发育时序的基因网络，并在功能上与 Notch、Wnt/β-连环蛋白以及 TGF-β 等信号通路发生交互。在小鼠模型中，Tcf3 活性改变会扰乱 B 细胞和 T 细胞的发育，并可重塑影响干/祖细胞维持的转录状态。E2A 依赖的转录调控回路失衡，常在致癌性转录因子网络以及免疫细胞成熟缺陷等研究背景中被关注。
E2A CRISPR/Cas9 KO质粒（m）是一组旨在针对性地破坏mouse细胞系中Tcf3基因的质粒池。每条质粒均共表达一种独特的单引导RNA（sgRNA），该sgRNA针对Tcf3基因内的特定位点，并携带来自化脓性链球菌的Cas9核酸酶。这些质粒还编码GFP，可通过荧光显微镜或流式细胞术对成功转染的细胞进行荧光标记和富集。
多引导设计提高了在Cas9介导的双链断裂形成后，产生破坏Tcf3开放阅读框的插入或缺失（indels）的概率。CRISPR/Cas9系统引入的DNA断裂通过内源性非同源末端连接（NHEJ）途径修复，通常会导致移码突变，从而使E2A蛋白表达失活。
该CRISPR敲除系统能够高效构建Tcf3缺失的细胞模型，用于E2A信号传导研究、功能基因组学研究、癌症生物学研究以及人类细胞系中治疗反应的评估。
主要特点
- 针对对 E2A 功能至关重要的 Tcf3 外显子的 sgRNA
通过单质粒共表达 SpCas9 和 sgRNA 以简化递送过程
GFP 报告基因用于识别转染细胞
针对多个 Tcf3 基因组位点的质粒池以提高敲除效率
兼容转染递送
设计变体
CRISPRs +/- HDR
- 由 E2A CRISPR/Cas9 KO 质粒 (m) 和 E2A CRISPR/Cas9 KO 质粒 (m2) 编码的 gRNA 分别靶向 Tcf3 基因座内的不同位点。可能提供其中一种或两种靶向设计。具体供应情况请参见相关产品。
由 E2A HDR 质粒（m）编码的 HDR 供体构建体以及 E2A HDR质粒（m2）编码的HDR供体构建体包含一个嘌呤霉素抗性盒和一个RFP报告基因，其两侧由Tcf3同源臂包围，以支持在与CRISPR/Cas9敲除设计对应的特定Tcf3靶位点进行同源导向修复。HDR供体的供应情况可能有所不同。请查看“相关产品”了解供应情况。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。