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DLK1CRISPR激活质粒(h) | sc-400798-ACT | 20 µg | CNY2986.00 |
DLK1(delta-like 1 homolog)编码一种跨膜及可溶性的配体,属于非经典的 Delta/Notch 家族,在发育与组织重塑过程中调节细胞—细胞信号传导。DLK1 会影响干细胞与祖细胞的行为、脂肪生成分化以及内分泌谱系程序,并且常与 DLK1-DIO3 位点的基因组印记调控相关联。通过与 Notch 相关信号输出及生长因子通路的串扰,DLK1 能在多种细胞类型中塑造增殖与分化状态。DLK1 表达失调与代谢表型改变及发育异常有关,并且常在肿瘤细胞可塑性与谱系进程研究中被重点关注。
DLK1 CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性DLK1的表达。
DLK1 CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的DLK1基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于DLK1转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性DLK1表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的DLK1位点,并能够研究内源性位点上依赖于DLK1的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在DLK1表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟DLK1通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。