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Desmin双切口酶质粒(h) | sc-400248-NIC | 20 µg | CNY3084.00 | |||
Desmin双切口酶质粒(h2) | sc-400248-NIC-2 | 20 µg | CNY3084.00 |
DES 基因编码结蛋白(desmin),这是一种 III 型中间丝蛋白,在横纹肌和平滑肌中形成关键支架,将 Z 盘、肌膜、线粒体和细胞核连接起来。结蛋白将细胞骨架结构与力学信号转导、细胞器定位以及细胞应激反应整合在一起,从而支持肌原纤维的排列与收缩功能。它参与中间丝的组装,并与肌动蛋白和微管网络发生交互影响,进而调控肌细胞分化与结构重塑。致病性 DES 变异以及结蛋白组织结构的异常与结蛋白相关肌病和心肌病有关,这些疾病以细胞质内结蛋白聚集体和肌肉结构完整性受损为特征,因此 DES 是研究肌肉退行性变机制的重要基因位点。
Desmin 双切酶质粒(h)由一对匹配的质粒组成,专为在 human 细胞系中对 DES 位点进行高特异性编辑而设计。每个质粒分别表达Cas9 D10A切口酶和针对DES内不同DNA链的独特sgRNA。当这两种切口酶被引导至相邻但位于DNA链相反侧的位点时,会产生错位的单链切口,从而共同形成错位双链断裂,这需要两个引导RNA在靶位点上协同发挥作用。由此产生的DNA断裂通过内源性细胞修复途径(最常见的是非同源末端连接(NHEJ))得到修复,从而导致插入或缺失,进而破坏DES的功能。通过要求双sgRNA在靶位点结合,双切口方法提高了编辑特异性,并为需要对靶向精度进行额外控制的应用提供了互补的CRISPR策略。
为高效识别编辑后的细胞,其中一个质粒编码GFP以实现转染细胞群的荧光可视化,而配套质粒则携带嘌呤霉素抗性基因用于抗生素筛选。这些特性共同支持共转染细胞群的高效富集,并简化了DES基因失活克隆的验证流程。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。