Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
CYP27A1 Antibody (G-2) Alexa Fluor® 488: sc-390974 AF488. Direct fluorescent western blot analysis of CYP27A1 expression in Hep G2 whole cell lysate (A) and human liver tissue extract (B). Blocked with UltraCruz® Blocking Reagent: sc-516214. Cruz Marker™ Molecular Weight Standards detected with Cruz Marker™ MW Tag-Alexa Fluor® 647: sc-516791.
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CYP27A1双切口酶质粒(h): sc-402836-NIC
- 针对种属：human
- 20 µg 纯化的即用型的质粒DNA，最多可供20次转染
- CYP27A1 双切口酶质粒（h）含有一对质粒，分别编码D10A突变的Cas9核酸酶，和目标特异的 20 nt 向导RNA （gRNA），与其相应的/%base_sku_name%/ CRISPR/Cas9敲除质粒相比，它在基因敲除方面具有更好的特异性
- 成对的向导RNA序列与目标基因中约20个碱基对互补，从而使Cas9可以模仿DNA双链断裂（DSB），介导特异的基因组DNA双切割
- 质粒对中的一个包含供筛选使用的嘌呤霉素抗性基因；另一个包含供观察转染使用的绿色荧光蛋白标记
- CYP27A1双切酶质粒（h）和CYP27A1双切酶质粒（h2）编码针对CYP27A1的不同配对gRNA设计。其中一种或两种设计可能均有提供
- 转染后，基因敲除效率可以用抗体：CYP27A1: sc-390974，通过WB, IF或者IHC分析
订购信息
| 产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格 | 数量 | 收藏夹 | |
CYP27A1双切口酶质粒(h) | sc-402836-NIC | 20 µg | CNY3084.00 | |||
CYP27A1双切口酶质粒(h2) | sc-402836-NIC-2 | 20 µg | CNY3084.00 |
人类 CYP27A1 编码固醇 27-羟化酶，这是一种线粒体细胞色素 P450 酶，在胆汁酸生物合成过程中催化胆固醇及固醇中间体的氧化反应。通过生成 27-羟化固醇，CYP27A1 支持线粒体固醇分解代谢，促进脂质稳态，并与肝脏胆汁酸生成、胆固醇转运以及氧固醇信号通路相互衔接。CYP27A1 活性改变会影响固醇和胆汁酸的组成，并与胆汁酸代谢的先天性缺陷（如脑腱黄瘤病）相关，进而影响胆固醇沉积及组织对固醇的处理。因此，CYP27A1 被广泛用于代谢生物学、线粒体 P450 功能以及由氧固醇介导的核受体网络调控等领域的研究。
CYP27A1 双切酶质粒（h）由一对匹配的质粒组成，专为在 human 细胞系中对 CYP27A1 位点进行高特异性编辑而设计。每个质粒分别表达Cas9 D10A切口酶和针对CYP27A1内不同DNA链的独特sgRNA。当这两种切口酶被引导至相邻但位于DNA链相反侧的位点时，会产生错位的单链切口，从而共同形成错位双链断裂，这需要两个引导RNA在靶位点上协同发挥作用。由此产生的DNA断裂通过内源性细胞修复途径（最常见的是非同源末端连接（NHEJ））得到修复，从而导致插入或缺失，进而破坏CYP27A1的功能。通过要求双sgRNA在靶位点结合，双切口方法提高了编辑特异性，并为需要对靶向精度进行额外控制的应用提供了互补的CRISPR策略。
为高效识别编辑后的细胞，其中一个质粒编码GFP以实现转染细胞群的荧光可视化，而配套质粒则携带嘌呤霉素抗性基因用于抗生素筛选。这些特性共同支持共转染细胞群的高效富集，并简化了CYP27A1基因失活克隆的验证流程。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。