cyclin D1CRISPR激活质粒(h): sc-400047-ACT

CCND1 编码细胞周期蛋白 D1（cyclin D1），是调控细胞周期从 G1 期向 S 期过渡的核心因子。它与并激活 CDK4/6，促进 RB 家族蛋白磷酸化，从而解除对 E2F 依赖性转录的抑制并释放其转录活性。cyclin D1 通过整合 MAPK/ERK、PI3K/AKT 等通路的促有丝分裂信号，将增殖刺激与细胞进入细胞周期相协调，并参与 DNA 复制及检查点应答的调控。CCND1 表达失调或基因扩增在多种癌症中常与异常增殖和基因组不稳定相关；cyclin D1 活性的改变也与分化程序及细胞代谢的变化有关。作为一个对转录调控高度敏感的细胞周期枢纽，CCND1 常用于在人源细胞模型中研究“信号传导—增殖”耦联关系以及肿瘤相关通路依赖性。

cyclin D1 CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性CCND1的表达。

cyclin D1 CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的CCND1基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于CCND1转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性cyclin D1表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的CCND1位点，并能够研究内源性位点上依赖于cyclin D1的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在CCND1表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟cyclin D1通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。