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CXCR-4CRISPR激活质粒(h) | sc-400254-ACT | 20 µg | CNY2986.00 | |||
CXCR-4CRISPR激活质粒(h2) | sc-400254-ACT-2 | 20 µg | CNY2986.00 |
CXCR4 编码趋化因子受体 CXCR-4,这是一种七次跨膜的 G 蛋白偶联受体(GPCR),可与 CXCL12/SDF-1 结合,在造血、免疫及基质细胞等系统中调控趋化运动、细胞定位以及组织归巢。CXCR-4 信号可激活多条下游通路,包括经 Gαi 介导的 cAMP 抑制、PI3K–AKT、MAPK/ERK、PLC–PKC 以及钙离子通量,从而整合影响细胞迁移、生存与黏附的多种信号线索。CXCR4 活性失调与白细胞转运异常、炎症性微环境的形成以及异常的细胞运动程序有关。由于具备这些功能,CXCR4 常被作为研究受体引导迁移、生态位相互作用以及微环境驱动表型的人类细胞模型中的关键节点。
CXCR-4 CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性CXCR4的表达。
CXCR-4 CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的CXCR4基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于CXCR4转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性CXCR-4表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的CXCR4位点,并能够研究内源性位点上依赖于CXCR-4的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在CXCR4表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟CXCR-4通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。