COL7A1CRISPR激活质粒(h): sc-401235-ACT

COL7A1 编码 VII 型胶原蛋白，这是一种关键的细胞外基质成分，可形成锚定纤维，将表皮基底膜与其下方的真皮连接起来。通过稳定真皮–表皮连接处，COL7A1 借助基质组织与细胞–基质黏附通路，支持组织完整性、力学信号转导以及创伤修复相关程序。COL7A1 表达或功能的改变会破坏基底膜结构，并与皮肤脆弱表型密切相关（包括营养不良型大疱性表皮松解症），同时还会导致再上皮化受损和纤维化重塑。因此，COL7A1 被广泛用于研究角质形成细胞–成纤维细胞串扰、细胞外基质组装以及上皮屏障生物学。

COL7A1 CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性COL7A1的表达。

COL7A1 CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的COL7A1基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于COL7A1转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性COL7A1表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的COL7A1位点，并能够研究内源性位点上依赖于COL7A1的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在COL7A1表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟COL7A1通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。