Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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CD73双切口酶质粒(h): sc-400307-NIC
- 针对种属：human
- 20 µg 纯化的即用型的质粒DNA，最多可供20次转染
- CD73 双切口酶质粒（h）含有一对质粒，分别编码D10A突变的Cas9核酸酶，和目标特异的 20 nt 向导RNA （gRNA），与其相应的/%base_sku_name%/ CRISPR/Cas9敲除质粒相比，它在基因敲除方面具有更好的特异性
- 成对的向导RNA序列与目标基因中约20个碱基对互补，从而使Cas9可以模仿DNA双链断裂（DSB），介导特异的基因组DNA双切割
- 质粒对中的一个包含供筛选使用的嘌呤霉素抗性基因；另一个包含供观察转染使用的绿色荧光蛋白标记
- CD73双切酶质粒（h）和CD73双切酶质粒（h2）编码针对NT5E的不同配对gRNA设计。其中一种或两种设计可能均有提供
- 转染后，基因敲除效率可以用抗体：CD73: sc-398260，通过WB, IF或者IHC分析
订购信息
| 产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格 | 数量 | 收藏夹 | |
CD73双切口酶质粒(h) | sc-400307-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CD73双切口酶质粒(h2) | sc-400307-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
人类 NT5E 基因编码 CD73（外源性 5′-核苷酸酶，ecto-5′-nucleotidase），这是一种通过糖基磷脂酰肌醇（GPI）锚定在细胞表面的酶，可将细胞外 AMP 水解为腺苷，从而塑造细胞周围空间中的嘌呤能信号传导与核苷酸平衡。通过调控腺苷的累积，CD73 影响 GPCR 介导的 cAMP 信号、内皮屏障功能、白细胞转运以及对缺氧的应答程序；这些程序与代谢适应和炎症信号相互交织。CD73 活性还参与调节血小板与血管反应，并可在不同组织环境中影响上皮–间质转化（EMT）、基质重塑以及免疫细胞极化。NT5E/CD73 的表达或酶活失调与免疫调控异常、血管钙化表型以及肿瘤微环境生物学改变有关，因此可作为研究炎症、纤维化及癌症相关通路的关键机制节点。
CD73 双切酶质粒（h）由一对匹配的质粒组成，专为在 human 细胞系中对 NT5E 位点进行高特异性编辑而设计。每个质粒分别表达Cas9 D10A切口酶和针对NT5E内不同DNA链的独特sgRNA。当这两种切口酶被引导至相邻但位于DNA链相反侧的位点时，会产生错位的单链切口，从而共同形成错位双链断裂，这需要两个引导RNA在靶位点上协同发挥作用。由此产生的DNA断裂通过内源性细胞修复途径（最常见的是非同源末端连接（NHEJ））得到修复，从而导致插入或缺失，进而破坏NT5E的功能。通过要求双sgRNA在靶位点结合，双切口方法提高了编辑特异性，并为需要对靶向精度进行额外控制的应用提供了互补的CRISPR策略。
为高效识别编辑后的细胞，其中一个质粒编码GFP以实现转染细胞群的荧光可视化，而配套质粒则携带嘌呤霉素抗性基因用于抗生素筛选。这些特性共同支持共转染细胞群的高效富集，并简化了NT5E基因失活克隆的验证流程。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。