CD47CRISPR激活质粒(h): sc-400508-ACT

人类 CD47 基因编码一种广泛表达于细胞表面的免疫球蛋白超家族蛋白，既作为“自身”识别信号，也作为黏附受体。CD47 可与髓系细胞上的 SIRPα 结合，从而调节吞噬作用与免疫监视；同时它还能结合血小板反应蛋白-1（thrombospondin-1），影响整合素信号传导、细胞骨架动态变化以及细胞迁移。通过这些相互作用，CD47 参与白细胞转运、血管与血小板生物学以及炎症反应调控等过程。CD47 表达失调与肿瘤—免疫相互作用异常、血液系统恶性肿瘤以及炎症性或纤维化病理状态相关，因此常被用作研究免疫逃逸机制与组织微环境重塑的重点靶标。

CD47 CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性CD47的表达。

CD47 CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的CD47基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于CD47转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性CD47表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的CD47位点，并能够研究内源性位点上依赖于CD47的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在CD47表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟CD47通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。