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CD1DCRISPR激活质粒(h) | sc-402435-ACT | 20 µg | CNY2986.00 |
CD1D 编码 CD1d,这是一种非经典的、类似 MHC I 类的抗原呈递分子,能够结合脂质和糖脂抗原,并将其展示于细胞表面,供恒定型自然杀伤 T(iNKT)细胞识别。通过塑造 iNKT 细胞的激活及其下游细胞因子程序,CD1d 在多种组织中参与免疫监视、免疫耐受以及炎症调控。依赖 CD1d 的脂质抗原呈递与内体运输、抗原加工以及类先天淋巴细胞的信号通路相互交织,从而影响肿瘤免疫学、感染生物学及慢性炎症状态。CD1D 的表达或功能发生改变,已被发现与自身免疫、代谢性炎症以及肿瘤微环境中观察到的免疫反应失衡相关。
CD1D CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性CD1D的表达。
CD1D CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的CD1D基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于CD1D转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性CD1D表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的CD1D位点,并能够研究内源性位点上依赖于CD1D的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在CD1D表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟CD1D通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。