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CD163CRISPR激活质粒(h) | sc-400435-ACT | 20 µg | CNY2986.00 |
CD163 编码一种巨噬细胞特异性的 SRCR 家族清道夫受体,可结合血红蛋白–触珠蛋白复合物并介导其内吞,从而将血红素解毒与抗氧化及铁代谢调控程序相连接。CD163 在单核细胞和组织巨噬细胞中高表达,并与抗炎性极化相关,可调节细胞因子信号网络,例如对 IL-10 反应的通路以及对先天免疫刺激的应答。通过影响细胞外血红蛋白的清除并重塑炎症基调,CD163 会改变感染、动脉粥样硬化和肿瘤相关微环境中的巨噬细胞活化状态。CD163 表达的改变也常被用作研究慢性炎症与免疫失衡时评估巨噬细胞浸润及表型的标志物。
CD163 CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性CD163的表达。
CD163 CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的CD163基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于CD163转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性CD163表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的CD163位点,并能够研究内源性位点上依赖于CD163的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在CD163表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟CD163通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。