The Double Nickase Plasmid features a U6 promoter for sgRNA expression, a 20 nt targeting sequence, and a gRNA scaffold to guide Cas9n. It includes a CBh promoter for Cas9n (D10A) and puromycin resistance, GFP for transfection verification, and nuclear localization signals (NLS). The 2A peptide allows co-expression of Cas9n and Puro from a single promoter, enabling precise genome editing with reduced off-target effects.
CD10双切口酶质粒(h): sc-400856-NIC
- 针对种属：human
- 20 µg 纯化的即用型的质粒DNA，最多可供20次转染
- CD10 双切口酶质粒（h）含有一对质粒，分别编码D10A突变的Cas9核酸酶，和目标特异的 20 nt 向导RNA （gRNA），与其相应的/%base_sku_name%/ CRISPR/Cas9敲除质粒相比，它在基因敲除方面具有更好的特异性
- 成对的向导RNA序列与目标基因中约20个碱基对互补，从而使Cas9可以模仿DNA双链断裂（DSB），介导特异的基因组DNA双切割
- 质粒对中的一个包含供筛选使用的嘌呤霉素抗性基因；另一个包含供观察转染使用的绿色荧光蛋白标记
- CD10双切酶质粒（h）和CD10双切酶质粒（h2）编码针对MME的不同配对gRNA设计。其中一种或两种设计可能均有提供
- 转染后，基因敲除效率可以用抗体：CD10: sc-46656，通过WB, IF或者IHC分析
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| 产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格 | 数量 | 收藏夹 | |
CD10双切口酶质粒(h) | sc-400856-NIC | 20 µg | CNY3084.00 |
MME 编码 CD10（neprilysin，亦称中性内肽酶），这是一种锌依赖性的膜结合金属内肽酶，能够通过切割多种具有生物活性的底物（包括脑啡肽、利钠肽以及与内皮素相关的肽）来调控细胞外肽类环境。通过调节配体可用性及受体信号强度，CD10 影响与细胞间通讯、炎症基调以及组织重塑相关的通路，作用范围涵盖上皮与造血系统。CD10 也被广泛用作谱系与分化标志物，其表达状态常在发育程序与肿瘤相关表型研究中被检测；在这些情境下，蛋白水解加工的改变可重塑微环境中的信号传递。对 MME 进行功能扰动，为在人类细胞模型中解析肽代谢网络及其下游转录反应提供了一种便捷可行的途径。
CD10 双切酶质粒（h）由一对匹配的质粒组成，专为在 human 细胞系中对 MME 位点进行高特异性编辑而设计。每个质粒分别表达Cas9 D10A切口酶和针对MME内不同DNA链的独特sgRNA。当这两种切口酶被引导至相邻但位于DNA链相反侧的位点时，会产生错位的单链切口，从而共同形成错位双链断裂，这需要两个引导RNA在靶位点上协同发挥作用。由此产生的DNA断裂通过内源性细胞修复途径（最常见的是非同源末端连接（NHEJ））得到修复，从而导致插入或缺失，进而破坏MME的功能。通过要求双sgRNA在靶位点结合，双切口方法提高了编辑特异性，并为需要对靶向精度进行额外控制的应用提供了互补的CRISPR策略。
为高效识别编辑后的细胞，其中一个质粒编码GFP以实现转染细胞群的荧光可视化，而配套质粒则携带嘌呤霉素抗性基因用于抗生素筛选。这些特性共同支持共转染细胞群的高效富集，并简化了MME基因失活克隆的验证流程。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。