CalretininCRISPR激活质粒(h): sc-401389-ACT

人类 CALB2 基因编码钙结合蛋白 calretinin，这是一种位于胞质的 EF-hand 型钙结合蛋白，可在兴奋性细胞和类神经内分泌细胞中调控细胞内 Ca2+ 缓冲与信号转导。Calretinin 会影响活动依赖性的钙动态变化、突触兴奋性，以及将钙通量与神经元分化和生存通路相耦联的下游转录程序。在科研中，CALB2 的表达常用于界定特定神经元亚型和中间神经元谱系，同时也支持对钙依赖性网络行为的功能研究。已有报道显示，CALB2 失调与多种疾病相关情境有关，包括神经发育信号异常以及肿瘤相关的谱系状态变化，因此推动了对 CALB2 驱动的钙信号表型开展机制研究。

Calretinin CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性CALB2的表达。

Calretinin CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的CALB2基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于CALB2转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性Calretinin表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的CALB2位点，并能够研究内源性位点上依赖于Calretinin的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在CALB2表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟Calretinin通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。