Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
CAD Antibody (G-11): sc-393029. Western blot analysis of CAD expression in untreated (A) and chemically-treated (B, C) HeLa whole cell lysates. β-Actin (C4): sc-47778 used as loading control. Detection reagent used: m-IgG Fc BP-HRP: sc-525409.
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CAD CRISPR/Cas9 KO质粒 (h): sc-403028
- 针对种属：human
- 20 µg 纯化的即用型的质粒DNA，最多可供20次转染
- CAD CRISPR/Cas9 基因敲除（KO）质粒（h） 是一组质粒混合物，每种质粒均编码 Cas9 核酸酶及针对特定靶点的 20 核苷酸引导 RNA（gRNA），其设计基于 GeCKO v2 文库中的序列，旨在实现最高的基因敲除效率
- gRNA序列引导Cas9在CAD基因组位点诱导位点特异性双链断裂（DSBs），从而通过非同源末端连接（NHEJ）实现基因敲除
- 嘌呤霉素抗性基因和 RFP 基因两侧有 LoxP 位点，因此在建立稳定的基因敲除细胞系后，可以通过 Cre 重组酶（Cre 向量：sc-418923）去除选择标记。
- 转染后，基因敲除效率可以用抗体：CAD: sc-374067，通过WB, IF或者IHC分析
订购信息
| 产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格 | 数量 | 收藏夹 | |
CAD CRISPR/Cas9 KO质粒 (h) | sc-403028 | 20 µg | CNY2986.00 |
概述
DFFB 编码半胱天冬酶激活的 DNase（caspase-activated DNase，CAD），即在细胞凋亡过程中负责核小体间（internucleosomal）DNA 片段化的内切核酸酶。在存活细胞中，CAD 通过与其抑制因子兼分子伴侣 ICAD（DFFA）结合而保持失活状态；当 ICAD 在 caspase-3 依赖性作用下被切割后，CAD 随之被激活，从而促使染色质降解并推动凋亡细胞核的拆解。该核酸酶活性将内源性与外源性凋亡通路与基因组完整性控制相联系，通过在程序性细胞死亡期间确保 DNA 被有序清除来发挥作用。CAD/ICAD 功能失调会干扰凋亡执行过程，并已在致癌转化、免疫细胞稳态以及与细胞死亡程序异常相关的组织退行性变等研究背景中受到关注。
CAD CRISPR/Cas9 KO质粒（h）是一组旨在针对性地破坏human细胞系中DFFB基因的质粒池。每条质粒均共表达一种独特的单引导RNA（sgRNA），该sgRNA针对DFFB基因内的特定位点，并携带来自化脓性链球菌的Cas9核酸酶。这些质粒还编码GFP，可通过荧光显微镜或流式细胞术对成功转染的细胞进行荧光标记和富集。
多引导设计提高了在Cas9介导的双链断裂形成后，产生破坏DFFB开放阅读框的插入或缺失（indels）的概率。CRISPR/Cas9系统引入的DNA断裂通过内源性非同源末端连接（NHEJ）途径修复，通常会导致移码突变，从而使CAD蛋白表达失活。
该CRISPR敲除系统能够高效构建DFFB缺失的细胞模型，用于CAD信号传导研究、功能基因组学研究、癌症生物学研究以及人类细胞系中治疗反应的评估。
主要特点
- 针对对 CAD 功能至关重要的 DFFB 外显子的 sgRNA
通过单质粒共表达 SpCas9 和 sgRNA 以简化递送过程
GFP 报告基因用于识别转染细胞
针对多个 DFFB 基因组位点的质粒池以提高敲除效率
兼容转染递送
设计变体
CRISPRs +/- HDR
- 由 CAD CRISPR/Cas9 KO 质粒 (h) 和 CAD CRISPR/Cas9 KO 质粒 (h2) 编码的 gRNA 分别靶向 DFFB 基因座内的不同位点。可能提供其中一种或两种靶向设计。具体供应情况请参见相关产品。
由 CAD HDR 质粒（h）编码的 HDR 供体构建体以及 CAD HDR质粒（h2）编码的HDR供体构建体包含一个嘌呤霉素抗性盒和一个RFP报告基因，其两侧由DFFB同源臂包围，以支持在与CRISPR/Cas9敲除设计对应的特定DFFB靶位点进行同源导向修复。HDR供体的供应情况可能有所不同。请查看“相关产品”了解供应情况。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。