ATF4 CRISPR/Cas9 KO质粒 (h2): sc-400155-KO-2
- 针对种属：human
- 20 µg 纯化的即用型的质粒DNA，最多可供20次转染
- ATF4 CRISPR/Cas9 基因敲除（KO）质粒（h2） 是一组质粒混合物，每种质粒均编码 Cas9 核酸酶及针对特定靶点的 20 核苷酸引导 RNA（gRNA），其设计基于 GeCKO v2 文库中的序列，旨在实现最高的基因敲除效率
- gRNA序列引导Cas9在ATF4基因组位点诱导位点特异性双链断裂（DSBs），从而通过非同源末端连接（NHEJ）实现基因敲除
- 嘌呤霉素抗性基因和 RFP 基因两侧有 LoxP 位点，因此在建立稳定的基因敲除细胞系后，可以通过 Cre 重组酶（Cre 向量：sc-418923）去除选择标记。
- 转染后，基因敲除效率可以用抗体：ATF4: sc-390063，通过WB, IF或者IHC分析
订购信息
| 产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格 | 数量 | 收藏夹 | |
ATF4 CRISPR/Cas9 KO质粒 (h2) | sc-400155-KO-2 | 20 µg | CNY2986.00 |
概述
激活转录因子4（ATF4）是一种 bZIP 转录因子，是整合性应激反应（integrated stress response, ISR）的核心成员。在 eIF2α 发生磷酸化后，ATF4会被优先翻译，并协调细胞的适应性转录程序。ATF4调控氨基酸代谢、氧化还原稳态、自噬以及内质网（ER）应激信号传导，并与 PERK–EIF2AK3、ATF3 和 CHOP/DDIT3 等通路发生串扰，以在细胞存活与凋亡结局之间实现平衡。通过控制营养感知与蛋白质稳态（proteostasis），ATF4影响线粒体功能和细胞分化程序，并参与缺氧与氧化应激条件下的转录重编程。ATF4活性失调与癌细胞的应激适应、与神经退行性疾病相关的蛋白毒性应激，以及代谢性疾病表型有关，因此它是研究应激响应基因网络机制的重要枢纽节点。
ATF4 CRISPR/Cas9 KO质粒（h2）是一组旨在针对性地破坏human细胞系中ATF4基因的质粒池。每条质粒均共表达一种独特的单引导RNA（sgRNA），该sgRNA针对ATF4基因内的特定位点，并携带来自化脓性链球菌的Cas9核酸酶。这些质粒还编码GFP，可通过荧光显微镜或流式细胞术对成功转染的细胞进行荧光标记和富集。
多引导设计提高了在Cas9介导的双链断裂形成后，产生破坏ATF4开放阅读框的插入或缺失（indels）的概率。CRISPR/Cas9系统引入的DNA断裂通过内源性非同源末端连接（NHEJ）途径修复，通常会导致移码突变，从而使ATF4蛋白表达失活。
该CRISPR敲除系统能够高效构建ATF4缺失的细胞模型，用于ATF4信号传导研究、功能基因组学研究、癌症生物学研究以及人类细胞系中治疗反应的评估。
主要特点
- 针对对 ATF4 功能至关重要的 ATF4 外显子的 sgRNA
通过单质粒共表达 SpCas9 和 sgRNA 以简化递送过程
GFP 报告基因用于识别转染细胞
针对多个 ATF4 基因组位点的质粒池以提高敲除效率
兼容转染递送
设计变体
CRISPRs +/- HDR
- 由 ATF4 CRISPR/Cas9 KO 质粒 (h) 和 ATF4 CRISPR/Cas9 KO 质粒 (h2) 编码的 gRNA 分别靶向 ATF4 基因座内的不同位点。可能提供其中一种或两种靶向设计。具体供应情况请参见相关产品。
由 ATF4 HDR 质粒（h）编码的 HDR 供体构建体以及 ATF4 HDR质粒（h2）编码的HDR供体构建体包含一个嘌呤霉素抗性盒和一个RFP报告基因，其两侧由ATF4同源臂包围，以支持在与CRISPR/Cas9敲除设计对应的特定ATF4靶位点进行同源导向修复。HDR供体的供应情况可能有所不同。请查看“相关产品”了解供应情况。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。