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Arginase 2/ARG2CRISPR激活质粒(h) | sc-400639-ACT | 20 µg | CNY2986.00 |
人类 ARG2 基因编码精氨酸酶2(arginase 2),这是一种线粒体金属酶,可将 L-精氨酸水解生成 L-鸟氨酸和尿素,从而影响细胞内精氨酸的可利用性及其下游多胺与脯氨酸的生物合成。通过与一氧化氮合酶(NOS)竞争 L-精氨酸,ARG2 会影响一氧化氮信号传导、氧化还原稳态以及免疫和基质细胞区室中的炎症极化。ARG2 的活性还与尿素循环相关的氮代谢处理、线粒体代谢以及调控增殖与应激反应的氨基酸转运网络相交织。ARG2 表达失衡与免疫代谢改变、血管功能障碍以及肿瘤微环境重塑有关,因此是研究精氨酸依赖性通路机制的一个重要节点。
Arginase 2/ARG2 CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性ARG2的表达。
Arginase 2/ARG2 CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的ARG2基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于ARG2转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性Arginase 2/ARG2表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的ARG2位点,并能够研究内源性位点上依赖于Arginase 2/ARG2的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在ARG2表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟Arginase 2/ARG2通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。