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ARF6双切口酶质粒(h) | sc-400799-NIC | 20 µg | CNY3084.00 | |||
ARF6双切口酶质粒(h2) | sc-400799-NIC-2 | 20 µg | CNY3084.00 |
ADP-核糖基化因子6(ARF6)是一种小GTP酶,在质膜及内体区室中调控膜运输、肌动蛋白细胞骨架重塑以及磷脂酰肌醇信号传导。ARF6通过在GDP结合态与GTP结合态之间循环转换,协调网格蛋白非依赖性内吞、膜蛋白回收以及整合素依赖的细胞黏附与迁移,并与涉及PI(4,5)P₂动态变化和Rho家族GTP酶的通路相互衔接。ARF6依赖的囊泡运输会影响受体内化及其下游信号输出,从而塑造细胞极性与胞质分裂等过程。ARF6活性失调与肿瘤生物学中侵袭行为改变和转移相关信号程序有关;此外,它还参与宿主-病原体入侵机制以及与疾病模型相关的神经发育过程。
ARF6 双切酶质粒(h)由一对匹配的质粒组成,专为在 human 细胞系中对 ARF6 位点进行高特异性编辑而设计。每个质粒分别表达Cas9 D10A切口酶和针对ARF6内不同DNA链的独特sgRNA。当这两种切口酶被引导至相邻但位于DNA链相反侧的位点时,会产生错位的单链切口,从而共同形成错位双链断裂,这需要两个引导RNA在靶位点上协同发挥作用。由此产生的DNA断裂通过内源性细胞修复途径(最常见的是非同源末端连接(NHEJ))得到修复,从而导致插入或缺失,进而破坏ARF6的功能。通过要求双sgRNA在靶位点结合,双切口方法提高了编辑特异性,并为需要对靶向精度进行额外控制的应用提供了互补的CRISPR策略。
为高效识别编辑后的细胞,其中一个质粒编码GFP以实现转染细胞群的荧光可视化,而配套质粒则携带嘌呤霉素抗性基因用于抗生素筛选。这些特性共同支持共转染细胞群的高效富集,并简化了ARF6基因失活克隆的验证流程。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。