Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
ALP Antibody (B-10): sc-365765. Western blot analysis of ALP expression in A549 (A), A-431 (B), HEK293 (C), HeLa (D), Jurkat (E) and K-562 (F) whole cell lysates.
Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
ALP双切口酶质粒(h): sc-401877-NIC
- 针对种属：human
- 20 µg 纯化的即用型的质粒DNA，最多可供20次转染
- ALP 双切口酶质粒（h）含有一对质粒，分别编码D10A突变的Cas9核酸酶，和目标特异的 20 nt 向导RNA （gRNA），与其相应的/%base_sku_name%/ CRISPR/Cas9敲除质粒相比，它在基因敲除方面具有更好的特异性
- 成对的向导RNA序列与目标基因中约20个碱基对互补，从而使Cas9可以模仿DNA双链断裂（DSB），介导特异的基因组DNA双切割
- 质粒对中的一个包含供筛选使用的嘌呤霉素抗性基因；另一个包含供观察转染使用的绿色荧光蛋白标记
- ALP双切酶质粒（h）和ALP双切酶质粒（h2）编码针对PDLIM3的不同配对gRNA设计。其中一种或两种设计可能均有提供
- 转染后，基因敲除效率可以用抗体：ALP: sc-365765，通过WB, IF或者IHC分析
订购信息
| 产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格 | 数量 | 收藏夹 | |
ALP双切口酶质粒(h) | sc-401877-NIC | 20 µg | CNY3084.00 | |||
ALP双切口酶质粒(h2) | sc-401877-NIC-2 | 20 µg | CNY3084.00 |
PDLIM3 编码 ALP（actinin-associated LIM protein，肌动蛋白结合蛋白相关 LIM 蛋白），这是一种含 PDZ–LIM 结构域的支架蛋白，富集于横纹肌，在细胞内主要定位于 Z 盘和肌膜致密斑（costameres）。ALP 将 α-辅肌动蛋白（α-actinin）及其他细胞骨架组分与信号复合体连接起来，从而支持肌小节的组织、机械信号转导以及肌动蛋白细胞骨架重塑。通过其衔接/适配功能，ALP 影响调控肌肉分化、收缩结构完整性和应激反应等通路。PDLIM3 表达异常或基因变异与心肌病和肌原纤维缺陷相关，因此是研究肌肉疾病机制的一个重要靶点。
ALP 双切酶质粒（h）由一对匹配的质粒组成，专为在 human 细胞系中对 PDLIM3 位点进行高特异性编辑而设计。每个质粒分别表达Cas9 D10A切口酶和针对PDLIM3内不同DNA链的独特sgRNA。当这两种切口酶被引导至相邻但位于DNA链相反侧的位点时，会产生错位的单链切口，从而共同形成错位双链断裂，这需要两个引导RNA在靶位点上协同发挥作用。由此产生的DNA断裂通过内源性细胞修复途径（最常见的是非同源末端连接（NHEJ））得到修复，从而导致插入或缺失，进而破坏PDLIM3的功能。通过要求双sgRNA在靶位点结合，双切口方法提高了编辑特异性，并为需要对靶向精度进行额外控制的应用提供了互补的CRISPR策略。
为高效识别编辑后的细胞，其中一个质粒编码GFP以实现转染细胞群的荧光可视化，而配套质粒则携带嘌呤霉素抗性基因用于抗生素筛选。这些特性共同支持共转染细胞群的高效富集，并简化了PDLIM3基因失活克隆的验证流程。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。