Each CRISPR/Cas9 Knockout (KO) Plasmid product consists of a pool of 3 plasmids designed to ensure identification and cleavage of a specific gene for maximum knockout efficiency. Each plasmid encodes a unique 20 nt sequence derived from the GeCKO (v2) library.
α-actinin-3 CRISPR/Cas9 KO质粒 (m): sc-418972
- 针对种属：mouse
- 20 µg 纯化的即用型的质粒DNA，最多可供20次转染
- α-actinin-3 CRISPR/Cas9 基因敲除（KO）质粒（m） 是一组质粒混合物，每种质粒均编码 Cas9 核酸酶及针对特定靶点的 20 核苷酸引导 RNA（gRNA），其设计基于 GeCKO v2 文库中的序列，旨在实现最高的基因敲除效率
- gRNA序列引导Cas9在α-actinin-3基因组位点诱导位点特异性双链断裂（DSBs），从而通过非同源末端连接（NHEJ）实现基因敲除
- 嘌呤霉素抗性基因和 RFP 基因两侧有 LoxP 位点，因此在建立稳定的基因敲除细胞系后，可以通过 Cre 重组酶（Cre 向量：sc-418923）去除选择标记。
- 转染后，基因敲除效率可以用抗体：α-actinin: sc-17829，通过WB, IF或者IHC分析
订购信息
| 产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格 | 数量 | 收藏夹 | |
α-actinin-3 CRISPR/Cas9 KO质粒 (m) | sc-418972 | 20 µg | CNY2986.00 |
概述
Actn3 编码 α-肌动蛋白结合蛋白-3（α-actinin-3），这是一种肌小节中的肌动蛋白结合蛋白，在快缩型骨骼肌纤维的 Z 盘处高度富集，在收缩过程中通过交联并稳定细肌丝发挥作用。α-actinin-3 通过组织收缩装置并参与肌小节力学特性，影响与糖酵解代谢及机械负荷应答相关的肌肉性能性状和纤维类型特性。α-actinin-3 功能缺失与肌力和耐力表型改变有关，并已在肌病、肌肉萎缩以及对运动或失用的适应等研究背景中得到探讨。在小鼠模型中，Actn3 提供了一个易于操控的体系，用于研究肌原纤维结构网络，以及调控收缩性、肌肉重塑和应激反应的相关通路。
α-actinin-3 CRISPR/Cas9 KO质粒（m）是一组旨在针对性地破坏mouse细胞系中Actn3基因的质粒池。每条质粒均共表达一种独特的单引导RNA（sgRNA），该sgRNA针对Actn3基因内的特定位点，并携带来自化脓性链球菌的Cas9核酸酶。这些质粒还编码GFP，可通过荧光显微镜或流式细胞术对成功转染的细胞进行荧光标记和富集。
多引导设计提高了在Cas9介导的双链断裂形成后，产生破坏Actn3开放阅读框的插入或缺失（indels）的概率。CRISPR/Cas9系统引入的DNA断裂通过内源性非同源末端连接（NHEJ）途径修复，通常会导致移码突变，从而使α-actinin-3蛋白表达失活。
该CRISPR敲除系统能够高效构建Actn3缺失的细胞模型，用于α-actinin-3信号传导研究、功能基因组学研究、癌症生物学研究以及人类细胞系中治疗反应的评估。
主要特点
- 针对对 α-actinin-3 功能至关重要的 Actn3 外显子的 sgRNA
通过单质粒共表达 SpCas9 和 sgRNA 以简化递送过程
GFP 报告基因用于识别转染细胞
针对多个 Actn3 基因组位点的质粒池以提高敲除效率
兼容转染递送
设计变体
CRISPRs +/- HDR
- 由 α-actinin-3 CRISPR/Cas9 KO 质粒 (m) 和 α-actinin-3 CRISPR/Cas9 KO 质粒 (m2) 编码的 gRNA 分别靶向 Actn3 基因座内的不同位点。可能提供其中一种或两种靶向设计。具体供应情况请参见相关产品。
由 α-actinin-3 HDR 质粒（m）编码的 HDR 供体构建体以及 α-actinin-3 HDR质粒（m2）编码的HDR供体构建体包含一个嘌呤霉素抗性盒和一个RFP报告基因，其两侧由Actn3同源臂包围，以支持在与CRISPR/Cas9敲除设计对应的特定Actn3靶位点进行同源导向修复。HDR供体的供应情况可能有所不同。请查看“相关产品”了解供应情况。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。