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ZNF750CRISPR激活质粒(h) | sc-408278-ACT | 20 µg | CNY2986.00 |
ZNF750 编码一种锌指转录因子,是上皮谱系决定与终末分化的关键调控因子,在角质形成细胞成熟和复层上皮稳态维持中发挥重要作用。它通过协同调控与分化相关的基因网络,调节与表皮屏障形成、细胞周期退出以及抑制祖细胞样状态相关的转录程序。ZNF750 表达的扰动与上皮分化失衡及增殖行为改变有关,因此与鳞状上皮生物学及相关疾病机制研究密切相关。作为一种核内 DNA 结合蛋白,ZNF750 是解析调控组织特异性基因表达的转录调控回路的一个便于研究的关键节点。
ZNF750 CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性ZNF750的表达。
ZNF750 CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的ZNF750基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于ZNF750转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性ZNF750表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的ZNF750位点,并能够研究内源性位点上依赖于ZNF750的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在ZNF750表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟ZNF750通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。