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ZNF326CRISPR激活质粒(h) | sc-404968-ACT | 20 µg | CNY2986.00 |
ZNF326 编码一种含锌指结构域的核蛋白,参与转录调控与 RNA 加工;已有研究报道其在协同转录伴随剪接以及维持细胞状态所需的基因表达程序方面发挥作用。作为一种与染色质相关的因子,ZNF326 可影响启动子近端的调控架构,以及转录与前体 mRNA 成熟过程之间的耦联,因此与调控增殖、分化和应激适应性基因表达的通路相关。文献中还指出,ZNF326 的表达或活性失调与癌症生物学及其他情境下的转录网络改变有关,而在这些情境中,异常的 RNA 代谢会促成疾病表型。上述特征使 ZNF326 成为研究转录—剪接串话及调控网络重塑机制的有用靶点。
ZNF326 CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性ZNF326的表达。
ZNF326 CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的ZNF326基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于ZNF326转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性ZNF326表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的ZNF326位点,并能够研究内源性位点上依赖于ZNF326的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在ZNF326表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟ZNF326通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。